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乙霉威是高效一种氨基甲酸酯类杀菌剂,能有效地防治对多菌灵产生抗性的液相原药灰霉病菌引起的葡萄及蔬菜病害,如黄瓜灰霉病、色谱甜菜叶斑病、法测番茄灰霉病,定乙也可用于防治茶腐病以及蔬菜水果的霉威防腐保鲜。
根据文献报道,含量乙霉威原药采用气相色谱分析方法具有较好的高效准确度和精密度,但采用液相色谱分析方法还未见报道。液相原药本文采用高效液相色谱法,色谱对试样中乙霉威进行定量分析。法测经过试验验证,定乙该方法操作简便、霉威快速、含量准确,高效分离效果好,准确度和精密度均能达到定量分析的要求,能够满足乙霉威原药的检验要求,是一种较为理想的分析方法。
甲醇:色谱纯;水:二次重蒸;乙霉威标样:已知含量≥99.0%(沈阳化工研究院);流动相:甲醇+水=60+40(体积比),流动相经0.45μm孔径的滤膜,并超声脱气10 min。
高效液相色谱仪:具有紫外可见波长检测器;色谱数据处理机或工作站;色谱柱:Nova-Pak C18不锈钢柱(4.6 mm×250 mm,5μm)。
流速:1.0 m L/min;柱温:室温(温差变化≤2℃);检测波长:254 nm;进样体积:20μL;保留时间约5.4 min。
上述操作参数是典型的,可根据仪器的特点,对给定的操作参数作适当调整,以期获得最佳效果,典型的乙霉威高效液相色谱图见图1。
称取乙霉威标样0.050 0 g (精确至0.000 2 g)置于100 m L容量瓶中,用甲醇溶解,并稀释至刻度摇匀,备用。
称取含乙霉威试样0.050 0 g (精确至0.000 2 g)置于100 m L容量瓶中,用甲醇溶解,并稀释至刻度摇匀,备用。
在上述操作条件下,待仪器稳定后,连续注入数针标样溶液,计算各针相对响应值的重复性,待相邻2针的响应值<1.0%后,按照标样溶液、试样溶液、试样溶液、标样溶液的顺序进行测定。
将测得的2针试样溶液以及试样前后2针标样溶液中的乙霉威峰面积分别进行平均,试样中乙霉威的质量分数X1(%)按式(1)计算:
式中:A1为标样溶液中乙霉威峰面积的平均值;A2为试样溶液中乙霉威峰面积的平均值;m1为乙霉威标样的质量,g;m2为乙霉威试样的质量,g;P为乙霉威标样的质量百分数,%。
准确配制一系列不同浓度的乙霉威标样溶液,在上述色谱条件下进行测定,以质量浓度为横坐标,峰面积为纵坐标,绘制标准曲线。乙霉威线性回归方程:Y=19 593x+13 984,相关系数:R2=0.999。本方法具有良好的线性相关性(图2)。
在上述色谱操作条件下,对同一乙霉威原药试样平行测定10次,测得标准偏差为0.254 7,变异系数为0.002 6%(表1)。
准确称取5个已知含量的乙霉威原药试样,分别加入一定量的乙霉威标样,在上述色谱操作条件下进行测定。乙霉威平均回收率为100.02%(表2)。
结果表明,采用本方法测定乙霉威含量的准确度和精密度较高,能满足定量分析要求。此方法线性关系良好,操作简单易行,能满足分析产品的检验要求。
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